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丙泊酚对大鼠缺血再灌注肾NF?κB、TNF?α表达的影响

来源:华世论文网
 

【摘要】  目的 研究丙泊酚对大鼠肢体缺血再灌注损伤后肾组织中肿瘤坏死因子?α(tumor necrosis factor?α,TNF?α)、核因子?κB(nuclear factor?κB,NF?κB)表达的影响。方法 24只SD雄性大鼠,随机分为假手术对照组(A组),肢体缺血再灌注组(B组)和丙泊酚干预组(C组),每组8只。采用免疫组织化学方法检测TNF?α、NF?κB的表达,行图像分析半定量。结果 B组大鼠肾组织中TNF?α、NF?κB的表达明显高于A组(P<0.05),C组明显低于B组(P<0.05)。结论 肢体缺血再灌注后有明显肾损伤,丙泊酚对肢体缺血再灌注肾损伤有一定程度的保护作用,其机制可能与下调大鼠肢体缺血再灌注损伤肾组织中TNF?α、NF?κB的过度表达有关。
  

【关键词】  丙泊酚;肾;肢体缺血再灌注;肿瘤坏死因子?α;核因子?κB

  肢体缺血再灌注损伤是外科常见的病理生理过程,如止血带使用时间过长、创伤、断指再植、血栓再通等都可以引起肢体缺血再灌注损伤。肢体缺血再灌注除了能引起相应的肢体损伤,还可以通过神经?内分泌?免疫机制引发远隔脏器障碍及损伤。肢体缺血再灌注对相应肢体损伤的研究已较成熟,但对于肢体缺血再灌注引起的远隔脏器肾损伤的研究却较少见。本研究拟观察大鼠肢体缺血再灌注后肾组织中肿瘤坏死因子?α(tumor necrosis factor?α,TNF?α)、核因子?κB(nuclear factor?κB,NF?κB)的变化以及丙泊酚对其损伤的干预。

  1  资料与方法

  1.1  动物模型制备  实验前禁食12 h,自由饮水,25%乌拉坦(1 g/kg)腹腔注射,麻醉后气管切开,接动物呼吸机机械通气(通气频率为75次/min,潮气量为8 mL,吸呼比为1∶2),于腹股沟处解剖出双侧股动脉,用无创动脉夹夹闭,远端股动脉置管测压,血压为零标志缺血成功,保持下肢缺血3 h后去除动脉夹再灌注4 h,恢复下肢血供,血压升高标志再灌注成功。

  1.2  分组及处理  24只清洁级SD雄性大鼠(山西医科大学动物中心提供),体重(200±20) g,随即分为三组,每组8只。假手术对照组(A组):大鼠麻醉后仅分离不夹闭股动脉;肢体缺血再灌注组(B组):夹闭股动脉缺血3 h,再灌注4 h;丙泊酚干预组(C组):夹闭股动脉前10 min静脉注射丙泊酚5 mg/kg(AstraZeneca公司,英国),随后以10 mg/kg?h静脉输注,缺血再灌注同B组。再灌注完毕,实验动物经心脏主动脉插管灌注固定液〔4%多聚甲醛0.1 mmol/L磷酸缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)配制〕后,处死大鼠取肾,置于10%甲醛溶液中固定24 h后常规石蜡包埋并切片,以备组织学检查。

  1.3  肾组织TNF?α、NF?κB的检测  选用链酶亲和素?过氧化物酶复合物即用型免疫组化试剂盒(武汉博士德),按说明书操作,取石蜡片按程序脱蜡,3%H2O2灭活内源性酶,微波抗原修复10 min,5%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)封闭,分别加免抗TNF?α多克隆抗体(武汉博士德)I抗、免抗NF?κBp65多克隆抗体(武汉博士德)I抗,稀释度为1∶80,冰箱过夜后加山羊抗鼠免疫球蛋白G,加酶标记物,DAB显色,光镜下观察。应用Laica图像分析系统,光镜放大400倍摄取图像,输入图像分析系统。每张切片随机选取60个区域,计算每张切片的平均光度,阳性单位。

  1.4  统计分析  计量数据以(±s)表示,统计分析采用SPSS12.0行方差分析和q检验,P<0.05为差异有统计学意义。

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