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蛙皮素对胆道梗阻大鼠肝脏氧化应激的影响

来源:华世论文网
 

              作者:陆培华 时开网 刘子君 杨坤兴

【摘要】  目的 探讨蛙皮素对胆道梗阻大鼠肝脏氧化应激的影响。方法 40只Wistar雄性大鼠随机分成4组:正常组、假手术组、黄疸组、蛙皮素组。术后第10天,下腔静脉检测血ALT、LPS水平,肝脏表达SOD、MDA、XOD、GSH衡量氧化应激状态,光镜下观察肝脏组织结构。结果 胆道梗阻下腔静脉ALT、LPS值升高, 肝脏SOD、GSH表达减少, MDA、XOD表达增加, 组织炎性细胞浸润较多, 肝脏高氧化应激。蛙皮素注射10 d,血清ALT、LPS水平及组织炎性细胞浸润减少,肝脏高氧化应激状态降低。结论 蛙皮素降低胆道梗阻大鼠肝脏氧化应激,其机制可能与肝脏蛋白激酶C、LPS水平及炎性细胞浸润有关。

【关键词】  蛙皮素 氧化应激 胆道梗阻 肝脏 大鼠

     Experiment study on bombesin affecting hepatic oxidative stress and its mechanism in rats with bile duct obstruction  LU Pei?hua, SHI Kai?wang, LIU Zi?jun, YANG Kun?xing. Department of General Surgery, First Hospital of Nanjing, Nanjing Medical University, Nanjing 210006, China

    【Abstract】  Objective  To evaluate the effect and mechanism of bombesin (BBS) on hepatic oxidative stress in rats with biliary tract obstruction. Methods  Forty male Wistar rats were randomly divided into four groups, ie, control group, sham operation group, bile duct ligation (BDL) group and BDL+BBS group. Ten days after operation, serum ALT and LPS levels were determined in inferior caval blood. Hepatic oxidative status was estimated on liver homogenates by measuring SOD, MDA, XOD and GSH. Meanwhile, liver tissue samples were examined histologically. Results  ALT and LPS were elevated in rats with biliary tract obstruction, which was accompanied by decrease of SOD and GSH and increase of MDA and XOD. Moreover, neutrophil accumulation in portal tracts was significantly increased, with liver in high oxidative stress status. Ten days after BBS administration, there could be seen reduced ALT and caval endotoxaemia, decreased neutrophil infiltration and degraded oxidative stress of the liver. Conclusion  BBS can degrade oxidative stress of the liver, which may be associated with LPS level, protein kinase C activity and neutrophil accumulation.

    【Key words】  Bombesin; Oxidative stress; Bile duct ligation; Liver; Rats

    蛙皮素(bombesin,BBS)是一种与人体内胃泌素释放肽的结构和功能都十分相似的14肽物质,具有促进胃肠激素分泌及肠黏膜上皮细胞增殖的作用。近年研究发现其有抗氧化损伤,保护肠道黏膜的作用[1]。高氧化应激也是胆道梗阻肝脏损伤的重要原因[2]。为此我们设计本实验探讨蛙皮素对胆道梗阻肝脏氧化应激的影响。

    1  材料与方法

    1.1  实验动物及试剂

    Wistar雄性大鼠40只,体重230~250 g,购自上海实验动物中心。蛙皮素([Lys3]?Bombesin,型号B1647)及牛血清白蛋白购自Sigma公司。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

    1.2  试剂配制

    首先用0.1%牛血清白蛋白1 ml溶解1 mg蛙皮素,然后用含0.25%牛血清白蛋白的生理盐水稀释成200 ml,分装后-20 ℃保存。

    1.3  实验设计

    大鼠随机分成4组:正常组、假手术组、黄疸组、蛙皮素组,每组各10只。均严格无菌操作,用氯胺酮(50 mg/kg)麻醉。取上腹正中切口约2~3 cm,解剖肝蒂,假手术组仅游离胆总管后关腹。黄疸组、蛙皮素组在距肝门0.5 cm处用4?0丝线双道结扎胆总管,制成胆道梗阻模型[3]。正常组不作任何处理。

    术后第1天起,蛙皮素组按3次/d皮下注射10 μg/mg蛙皮素溶液0.5 ml,正常组、假手术组、黄疸组按3次/d皮下注射生理盐水0.5 ml。术后第10天,各鼠留取下腔静脉血约2 ml、肝脏约0.5 g后,放血使其死亡。

    1.4  检测指标

    1.4.1  谷氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素(LPS)

    血清ALT值由日本Olympus AU2700全自动生化检测系统检测;LPS水平按凝固蛋白引起的浊度变化进行定量,由北京金山川公司MB?80微生物快速动态检测系统检测。

    1.4.2  SOD、MDA、XOD、GSH    准确称取肝脏组织0.5 g按质量体积比1∶9加入生理盐水,制成10%的匀浆,2 500 r/min,离心10 min,再用生理盐水稀释成0.1%的组织匀浆待测。参照试剂盒说明书,SOD用黄嘌呤氧化酶法,按每毫升匀浆蛋白在1 ml反应液中抑制率达50%时对应的SOD量为一个活力单位。MDA通过改良TBA法,定量每毫克肝脏匀浆所含MDA值。XOD用四唑盐比色法,按每克组织蛋白在37 ℃每分钟转化为1 μmol底物所需的酶量为一个酶活力单位。GSH通过与DTNB反应生成一种黄色化合物比色法定量每毫升匀浆中GSH值。处理好的标本用分光光度计检测。

    1.5  光镜切片的制备观察

    新鲜肝脏组织用福尔马林固定、石蜡包埋、切片、HE染色后显微镜观察肝脏汇管区小胆管数量,炎性细胞浸润及胆管上皮增殖程度。

    1.6  统计学分析

    实验数据用SPSS 11.5统计软件处理,计量资料以±s表示,组间比较以Levene's检验,方差齐性后使用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。

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